Alteraciones del microbioma en mujeres con prolapso de órganos pélvicos y después de intervenciones anatómicas restauradoras.
Scientific Reports volumen 13, número de artículo: 17547 (2023) Citar este artículo
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El prolapso de órganos pélvicos (POP) es una enfermedad ginecológica benigna en la que el órgano pélvico desciende a la vagina y provoca disfunción miccional y defecatoria, ocurre principalmente en mujeres mayores. Este estudio tuvo como objetivo investigar el microbioma vaginal de POP y los cambios asociados después de un pesario restaurador anatómico o una operación pélvica reconstructiva. Analizamos el microbioma vaginal mediante la secuenciación del gen del ARN ribosomal 16S y comparamos los resultados entre los grupos de pacientes con POP, pesario y posoperación. También medimos 10 citocinas relacionadas con la inflamación en muestras de hisopos vaginales mediante inmunoensayo múltiple. En el prolapso de órganos pélvicos, el estado comunitario vaginal tipo IV fue el más prevalente, que mostró una baja abundancia de Lactobacillus con mayor diversidad y abundancia de especies anaeróbicas. La diversidad alfa de la riqueza de especies fue mayor en el grupo POP. La distancia de diversidad beta difirió significativamente entre los tres grupos (p = 0,001). Si bien las bacterias asociadas a los taxones intestinales humanos se redujeron después del pesario o la operación, la composición bacteriana asociada a la vaginitis se alteró pero la homeostasis del microbioma vaginal no mejoró. Los niveles de IFN-γ, IL-10, IL-12p70, IL-1β, IL-4 y TNF-α aumentaron en el grupo del pesario. Por tanto, además del tratamiento de restauración anatómica, puede ser necesario un tratamiento complementario centrado en la recuperación del microbioma vaginal para mantener la salud de los órganos ginecológicos en la vejez.
El prolapso de órganos pélvicos (POP) es una afección ginecológica benigna caracterizada por el descenso de los órganos pélvicos hacia la vagina, provocando abultamiento y presión vaginal, además de disfunción miccional y defecatoria1,2. Según la Encuesta Nacional de Examen de Salud y Nutrición, aproximadamente el 3% de las mujeres en los Estados Unidos reportan síntomas de POP3 y la incidencia máxima de síntomas de POP se da en mujeres de 70 a 79 años2. En Corea2, la cirugía POP alcanza su punto máximo en mujeres de aproximadamente 70 años y el uso de pesario ha aumentado dramáticamente en mujeres mayores de 65 años. El POP no se diagnostica bien hasta que aparecen los síntomas; la prevalencia del POP basada en los síntomas informados fue mucho menor (del 3 al 6 %) que la prevalencia identificada mediante el examen (del 41 al 50 %)4. A medida que la sociedad envejece, se espera que enfermedades como el prolapso de órganos pélvicos, debido a la prolongación de la vida, aumenten gradualmente.
Muchas mujeres experimentan síntomas de POP a medida que envejecen, pero aún no existe un diagnóstico, tratamiento o tratamiento estandarizados. Las opciones de tratamiento POP se centran en restaurar la estructura anatómica e incluyen: un pesario vaginal no quirúrgico de reversión eficaz y una operación reconstructiva vaginal permanente1. La edad del paciente, la condición médica y la preferencia por la cirugía son los factores que se consideran al decidir una opción de tratamiento. Para pacientes mayores con una enfermedad subyacente, se prefiere el tratamiento conservador no quirúrgico.
El uso de pesarios o la operación reconstructiva produce una mejoría de los síntomas y, aunque las tasas de éxito de los pesarios oscilan entre el 77% y el 92%5, el uso continuo podría causar alteración del microbioma intravaginal y daño de la mucosa, lo que resulta en un aumento de la secreción y sangrado genital anormal6,7. Se sabe poco sobre los cambios en el microbioma intravaginal en usuarias de pesarios, por lo que los ensayos de eficacia terapéutica para renovar el microbioma vaginal son raros. La reconstrucción vaginal es un procedimiento quirúrgico que tiene como objetivo reconstruir el canal vaginal y sus tejidos circundantes8. Sin embargo, la operación POP puede provocar complicaciones, como fístula rectovaginal o vesicovaginal, lesión ureteral, vagina acortada, prolapso recurrente de órganos pélvicos (6-30%)9, disfunción miccional y dolor pélvico1. La microbiota vaginal alterada se refiere a un desequilibrio en la composición microbiana normal dentro de la vagina. En un estado saludable, en la microbiota vaginal predominan los lactobacilos, que ayudan a mantener un ambiente ligeramente ácido y brindan protección contra posibles patógenos. Este estado de equilibrio es crucial para la salud vaginal. El órgano pélvico que sobresale podría cambiar el microbioma vaginal mediante la fricción y la exposición externa, y los pesarios causaban más fácilmente daño a la mucosa intravaginal y también potencialmente alteraban el microbioma más fácilmente6. La investigación sobre este tema es limitada y los cambios exactos que ocurren aún no se comprenden bien en el prolapso de órganos pélvicos.
En este estudio, nuestro objetivo fue evaluar y comparar el microbioma vaginal de pacientes con POP, tratamiento con pesario y operación de reconstrucción pélvica mediante secuenciación de ARNr 16S, y evaluar la relación de las citoquinas relacionadas con la inflamación en las muestras de hisopos vaginales en prolapso, pesario, y grupos posoperatorios mediante inmunoensayo multiplex.
En este estudio se inscribieron setenta mujeres coreanas con una edad media de 71,1 ± 9,9 años y un índice de masa corporal (IMC) de 25,2 ± 3,1 kg/m2. Las características clínicas de los pacientes con POP se resumen y muestran mediante estadísticas descriptivas en la Tabla 1. La edad promedio de los grupos de prolapso, pesario y posoperatorio fue de 68,0 ± 9,7, 79,7 ± 5,9 y 69,6 ± 8,7 años, respectivamente. Según el sistema POP-Q, la mayoría de los participantes cumplieron los criterios para POP en estadio II y III (n = 48, 81,4%) y se observaron síntomas urológicos (frecuencia, urgencia) en 28 participantes (47,5%). Enfermedades médicas subyacentes (diabetes mellitus, hipertensión, accidente cerebrovascular y enfermedad de la tiroides) estuvieron presentes en 56 pacientes (80%). La enfermedad subyacente fue mayor en el grupo de pesario, pero no hubo diferencia estadística (94,1%, p = 0,13).
IFN-γ (prolapso (6,30 ± 1,03 pg/mL) versus pesario (10,42 ± 1,21 pg/mL), p = 0,0005), IL-1β (prolapso (122,9 ± 247,2 pg/mL) versus pesario (906,6 ± 291,2 pg/mL) mL).mL), p = 0,0064), IL-4 (prolapso (12,57 ± 2,45 pg/mL, p = 0,0003), postoperatorio (12,57 ± 3,30 pg/mL, p = 0,0087) versus pesario (22,67 ± 2,88 pg/ mL)); , IL-10 (prolapso (15,80 ± 7,98 pg/mL) versus pesario (46,30 ± 9,40 pg/mL), p = 0,0008), IL-12p70 (prolapso (5,30 ± 1,05 pg/mL, p = 0,0002 ), postoperatorio (4,40 ± 1,41 pg/ml, p = 0,0012) versus pesario (9,70 ± 1,23 pg/ml)) y TNF-α (prolapso (19,30 ± 10,94 pg/ml) versus pesario (65,30 ± 12,89 pg/ml) ), p = 0,0002) fueron estadísticamente mayores en el grupo de pesario (Fig. 1).
Vías inflamasomadependientes. Según la puntuación de correlación de Pearson, los componentes pertenecientes al complejo inflamasómico se correlacionaron significativamente (FDR p < 0,001) con el grupo POP (prolapso, pesario y postoperatorio). La asociación se calculó utilizando el script observe_metadata_correlation.py en otu_table.biom enrarecido (5000 lecturas/muestra). Los niveles de IFN-γ, IL-1β, IL-4, IL-10, IL-12p70 y TNF-α variaron entre los grupos. Las comparaciones se realizaron mediante análisis de varianza unidireccional. Cuando se observó un valor de p significativo (p menor que 0,05), se utilizó una prueba de comparación múltiple para determinar qué grupos eran diferentes. Los datos se muestran como el valor medio ± error estándar de la media (SEM). Las puntuaciones de Pearson para cada especie bacteriana se muestran entre paréntesis. FDR, tasa de descubrimiento falso. **p < 0,05, ***p < 0,001.
El total de lecturas válidas de la secuenciación del gen 16S rRNA de la muestra de pacientes (n = 70) osciló entre 22 685 y 143 510 (mediana = 39 766) determinadas después del control de calidad (se eliminaron los amplicones de baja calidad, los amplicones no objetivo y las quimeras). La longitud de lectura promedio fue de 418 ± 5 pb por muestra. El número de OTU en las muestras osciló entre 65 y 468 (mediana, 152), y el número de especies encontradas osciló entre 30 y 409 (mediana, 135). El porcentaje promedio de lecturas válidas identificadas a nivel de especie fue 98,4 ± 4,4% ( media ± DE).
La composición taxonómica promedio (%) a nivel de filo en los tres grupos de estudio se muestra en la Fig. 2a. En el grupo de prolapso, Firmicutes (55,8%) fue el más alto, seguido de Actinobacteria (24,7%), Bacteroidetes (10,3%) y Fusobacteria (1,0%). En el grupo de pesario, se encontraron los mismos filos pero en proporciones similares: en el grupo de pesario, se encontraron filos de Firmicutes (25,4%), Actinobacteria (24,6%), Bacteroidetes (23,9%) y Fusobacteria (18,8%). dimensiones. En el grupo postoperatorio, Bacteroidetes (36,9%) fue el más alto, seguido de Firmicutes (30,5%), Fusobacteria (15,2%) y Actinobacteria (9,6%). La abundancia relativa (%) de Firmicutes en el grupo de prolapso fue la más alta de los tres grupos (p = 0,0024 según la prueba de Kruskal-Wallis, con medianas de 61,4% para prolapso, 18,6% para pesario y 24,6% para postoperatorio, respectivamente). .
Diferencias en el MTP vaginal entre los grupos de prolapso, pesario y postoperatorio. (a) Abundancias relativas (%) a nivel de filo entre los grupos de prolapso (n = 42), pesario (n = 17) y posoperatorio (n = 11). (b) Los índices de diversidad alfa mostraron diferencias estadísticas en la riqueza de especies (ACE y Chao) entre los tres grupos, pero no hubo diferencias estadísticas en la diversidad (NPShannon y Shannon). Prueba no paramétrica, *p < 0,05, **p < 0,01 y ***p < 0,001. (c) Gráficos de análisis de coordenadas principales (PCoA) basados en distancias de diversidad beta de Jensen-Shannon a nivel de especie. p = 0,002 para el grupo de prolapso y pesario, p = 0,003 para el grupo de prolapso y posoperatorio, y p = 0,548 para el grupo de pesario y posoperatorio mediante PERMANOVA por pares con 999 permutaciones. (d) Cladograma basado en el tamaño del efecto del análisis discriminante lineal (LEfSe) que muestra la distribución filogénica diferencial de los taxones bacterianos relacionados con los grupos de prolapso (rojo), pesario (azul) y posoperatorio (verde). Se indican los nombres taxonómicos de los filos; y se abrevian clase, orden, familia y género.
Los índices de diversidad alfa mostraron diferencias estadísticas en la riqueza de especies entre los tres grupos (ACE: mediana 262, 141 y 147 (p < 0,0001) y Chao: mediana 222, 99 y 132 (p < 0,0001), en el prolapso, pesario y posoperatorio. grupos, respectivamente). Estos resultados indicaron que la riqueza de especies fue mayor en el grupo de prolapso (Fig. 2b).
En la Fig. 2c se muestran gráficos de PCoA basados en el índice de Jensen-Shannon, a nivel de especie. La distancia de diversidad beta mostró una diferencia significativa entre los tres grupos mediante PERMANOVA con 999 permutaciones (p = 0,0001). Además, la importancia de la diversidad beta según los resultados de PERMANOVA fue de p = 0,002 entre los grupos de prolapso y pesario, p = 0,003 entre los grupos de prolapso y postoperatorio, y p = 0,548 entre los grupos de pesario y postoperatorio. Los resultados revelaron que la composición taxonómica del grupo de prolapso era diferente de la de los grupos de pesario y postoperatorio.
El cladograma basado en LEfSe mostró una distribución filogénica diferencial de los taxones bacterianos asociados con cada grupo (Fig. 2d, Tabla complementaria 1).
Brevemente, en el grupo de prolapso, el filo Firmicutes y los taxones inferiores, incluidos los géneros Staphylococcus, Faecalibacterium y Fastidiosipila, se enriquecieron significativamente. En el grupo del pesario, el filo Fusobacteria y los taxones inferiores, incluidos los géneros Fusobacterium y Sneathia, se enriquecieron significativamente. En el grupo posoperatorio, el filo Bacteroidetes y los taxones inferiores, incluido el género Prevotella, se enriquecieron significativamente.
En el grupo de Prolapso, según el sistema POP-Q (nivel de introito de descenso uterino), hubo dos pacientes en estadio I, 14 en II, 20 III y seis pacientes en estadio IV. Sin embargo, los índices de diversidad Alfa no mostraron diferencias estadísticas en la riqueza de especies (p = 0,6921 para ACE y p = 0,6272 para Chao mediante la prueba de Kruskal-Wallis) o diversidad de especies (p = 0,0867 para NPShannon y p = 0,0867 para Shannon mediante la prueba de Kruskal-Wallis ) según el sistema POP-Q. Además, no hubo diferencias estadísticas en la distancia de diversidad beta, según el sistema POP-Q (p = 0,212) en el grupo de prolapso.
El grupo CST se clasificó según la especie de Lactobacillus predominante (Fig. 3a). En general, el grupo IV de CST (baja abundancia de Lactobacillus y mayor diversidad y abundancia de especies anaeróbicas) fue el más prevalente (82,9 %, 58/70). En el grupo de prolapso, la CST IV fue del 71,4 % (30/42), seguida del 16,7 % (7/42) para la CST del grupo III con dominancia de L. iners y del 4,8 % (2/42) para la CST con dominancia de L. crispatus. I, 4,8% (2/42) para el grupo CST dominante de L. gasseri II, 2,4% (1/42) para el grupo CST mixto con co-dominancia de dos especies de Lactobacillus. Los grupos de pesario (17/17) y postoperatorio (11/11) tenían solo CST del grupo IV.
Grupos de tipo de estado comunitario (CST) basados en las especies dominantes de Lactobacillus. (a) Distribución de frecuencia de prolapso (n = 42), pesario (n = 17) y grupos posoperatorios (n = 11). (b) Mapa de calor de la abundancia relativa de 22 taxones microbianos representativos en la microbiota vaginal de los 70 casos (la clave de color indica el porcentaje de abundancia del taxón). El índice de Shannon muestra la diversidad de especies y la uniformidad de cada muestra.
La abundancia relativa de taxones microbianos representativos (22) en la microbiota vaginal en los tres grupos se muestra en un mapa de calor (Fig. 3b). El índice de Shannon, que indica la diversidad de especies y la uniformidad para cada muestra, fue relativamente alto en el grupo IV del CST.
Además, comparamos la relación entre los grupos CST y 10 citocinas utilizando ANNOVA unidireccional para investigar más a fondo la relación entre la microbiota y las citocinas. Como resultado, no hubo citoquinas que fueran significativamente diferentes del grupo CST I (n = 2), grupo II (n = 2), grupo III (n = 7), grupo IV (n = 58) y mixto (n = 1) (datos no mostrados).
Para estimar la contaminación de taxones del intestino humano en MTP vaginal en cada grupo, comparamos la abundancia relativa de 11 taxones del intestino humano que generalmente se sabe que son importantes en el intestino humano a través de muchos estudios previos10,11 (familia Christensenellaceae, Enterobacteriaceae, Lachnospiraceae y Ruminococcadeae; géneros Akkermansia, Bacteroides, Blautia, Campylobacter, Clostridium, Escherichia y Faecalibacterium). Entre ellos, las proporciones de Lachnospiraceae, Ruminococcaceae, Blautia, Clostridium y Faecalibacterium fueron significativamente diferentes (p = 0,0187, 0,0053, 0,0006, 0,0466 y 0,0014, respectivamente), y todas fueron mayores en el grupo de prolapso (Fig. 4a). La abundancia relativa de los 22 taxones microbianos representativos, asociados con la salud vaginal, reveló que Anaerococcus, Finegoldia magna, Fusobacterium nucleatum, Lactobacillus iners, Leptotrichia amnionii, Peptoniphilus harei y Prevotella bivia fueron significativamente diferentes entre los tres grupos (p < 0,0001, 0,0019, 0,0251, 0,0399, 0,0039, 0,0355 y 0,0480, respectivamente) (Fig. 4b). Curiosamente, hubo diferencias en las especies de vaginitis bacteriana dominante Anaerococcus, F. magna y L. iners fueron altas en el grupo de prolapso; F. nucleatum y L. amnionii tuvieron niveles altos en el grupo del pesario; P. harei y P. bivia fueron elevados en el grupo postoperatorio. Sin embargo, la abundancia de Atopobium vaginae, Gardnerella vaginalis y Prevotella timonensis no fue estadísticamente diferente entre los tres grupos (p = 0,9039, 0,3426 y 0,0907, respectivamente, según la prueba de Kruskal-Wallis). Estos resultados indican que la contaminación por la microbiota intestinal en pacientes con POP se redujo después del pesario o la cirugía, mientras que las bacterias dominantes relacionadas con la vaginitis cambiaron después del tratamiento en lugar de reducirse definitivamente.
Abundancia relativa (%, eje y) de los taxones estadísticamente significativos en la microbiota vaginal entre tres grupos (eje x): prolapso (n = 42) versus pesario (n = 17) versus grupo postoperatorio (n = 11) . (a) Abundancia relativa a nivel de familia o género de taxones importantes conocidos del intestino humano y (b) Abundancia relativa a nivel de especie de 22 taxones microbianos representativos asociados con la salud vaginal. Los diagramas horizontales y de caja muestran la mediana y los cuartiles, respectivamente. Prueba no paramétrica, *p < 0,05, **p < 0,01 y ***p < 0,001.
En el presente estudio, investigamos y comparamos el microbioma vaginal de pacientes con POP, pacientes tratadas con pesario y pacientes tratadas con operación reconstructiva. El estudio de Yoshimura et al.12 demostró que las pacientes con tratamiento con pesario con Lactobacillus no siempre alteraban la flora microbiana intravaginal. Sin embargo, las pacientes con erosiones con pesario mostraron diferencias significativas en su microbiota vaginal, que contenía una diversidad bacteriana mucho mayor con un aumento de bacterias gramnegativas y una disminución de lactobacilos13. Alnaif y Drutz14 informaron un mayor riesgo de vaginosis bacteriana en usuarias de pesarios y sugirieron que los cambios en la flora vaginal pueden estar asociados con el desarrollo de erosión vaginal, lo cual es consistente con nuestros hallazgos. Aún no existe un estudio comparativo del microbioma vaginal en el grupo sano, el grupo POP y el grupo de pesario.
La diversidad microbiana vaginal difirió entre los tres grupos. El grupo POP mostró la mayor abundancia de especies y la distribución de la composición taxonómica fue diferente a la de los grupos de pesario y postoperatorio. En particular, la distribución de CST IV fue mayor que la de otras CST en el grupo de prolapso, y no hubo diferencias estadísticas en la diversidad del microbioma entre las diferentes etapas de POP (etapa I, II, III, IV).
Curiosamente, la CST IV solo se observó en los grupos de pesario y postoperatorio, lo que indica que este resultado sugiere que ambos tratamientos no tuvieron ningún efecto sobre el microbioma vaginal. Los tamaños de muestra de los tres grupos son significativamente diferentes, siendo CST IV la concentración principal. Quizás la aparición de CST con predominio de lactobacilos sea un evento aleatorio, o quizás la recuperación de los lactobacilos lleve tiempo. Por lo tanto, se necesitan estudios de seguimiento a largo plazo para rastrear los cambios durante un período prolongado. Es posible que las evaluaciones a corto plazo no revelen una imagen completa de cómo responde y evoluciona el microbioma después del tratamiento.
El estudio encontró que después de que se restableció la anatomía mediante un pesario o un tratamiento quirúrgico, hubo una reducción en la contaminación por la microbiota intestinal en la vagina. Aunque el tratamiento puede haber tenido éxito en restaurar la anatomía y reducir la contaminación de la microbiota intestinal, es posible que no haya sido efectivo para eliminar las bacterias relacionadas con la vaginitis, que pueden causar infecciones vaginales y otros problemas de salud vaginal.
Según Amabebe y Anuroba15, la microbiota predominantemente lactobacilos confiere un ambiente antiinflamatorio, resultante de la producción de ácido láctico, que estimula la producción de grandes cantidades de citoquinas antiinflamatorias que a su vez inhiben la unión del patógeno al epitelio vaginal y disminuyen la riesgo de otras infecciones. Las comunidades vaginales dominadas por Lactobacillus crispatus se asociaron con niveles más bajos de citoquinas relacionadas con la inflamación (p. ej., IL-1α, IL-1β e IL-8) en comparación con las comunidades dominadas por bacterias asociadas a la VB o Lactobacillus iners16,17. No hubo citocinas que fueran significativamente diferentes entre los grupos de CST en este estudio, lo que debe tenerse en cuenta que el número de CST del grupo IV es alto y el número de otros grupos es muy pequeño, lo que puede hacer que las comparaciones estadísticas sean imprecisas. Además, es posible que la anotación a nivel de especie basada en la secuenciación de ARNr de 16 s no alcance la precisión requerida para la agrupación CST. Curiosamente, el uso del pesario provocó un aumento de citocinas como IFN-γ, IL-1β, IL-4, IL-10, IL-12p70 y TNF-α, lo que sugiere que el uso del pesario puede provocar un aumento de la inflamación. Además, incluso con la restauración anatómica, el riesgo de inflamación (secreción vaginal, sangrado y erosión)7 todavía parecía aumentar debido al efecto del cuerpo extraño.
Se ha informado que la terapia con probióticos es útil para mantener la flora microbiana intravaginal normal. Los estudios han demostrado que ciertas cepas de probióticos, como las especies de Lactobacillus y su interacción multimicrobiana, pueden ayudar a restaurar y mantener un equilibrio saludable de bacterias en la vagina18,19. La actividad probiótica y los efectos protectores atribuidos a los lactobacilos en la microbiota vaginal están influenciados por varios factores, incluida la composición y diversidad del consorcio microbiano presente20. La eficacia de los lactobacilos para promover la salud vaginal no está determinada únicamente por su número total sino también por las especies y cepas específicas de lactobacilos presentes19,20. Las diferentes especies de Lactobacillus pueden tener distintos efectos sobre la salud vaginal, y ciertas cepas podrían ser más efectivas para promover una microbiota equilibrada y prevenir infecciones21,22.
Se sabe que la terapia con estrógenos ayuda a mejorar el microbioma vaginal en mujeres posmenopáusicas21; no se ha realizado ningún ensayo controlado aleatorio que analice el beneficio del uso de estrógenos intravaginales en mujeres con pesarios23. Se ha informado que el uso de pesarios WO 3191 (que contienen el tensioactivo anfótero cocoanfopropionato) y, al igual que los pesarios de ácido láctico (que contienen ácido láctico y lactato de sodio), previenen la recurrencia de la vaginosis bacteriana 24. Estos pesarios no pudieron prevenir la vaginosis bacteriana recurrente, y el Lactobacillus sp. asociado a la salud. como L, crispatus es más importante para mantener la estabilización del microbioma vaginal24. La disbiosis de la microbiota vaginal, caracterizada por la pérdida de la dominancia de Lactobacillus y el aumento de la diversidad microbiana, se observó en las pacientes con POP y está estrechamente relacionada con enfermedades ginecológicas24. Por lo tanto, mejorar la distribución vaginal de especies de Lactobacillus como L. crispatus y restaurar la composición del microbioma vaginal en pacientes con POP es importante para prevenir más enfermedades ginecológicas inducidas por POP.
Nuestro estudio es importante porque es el primero en comparar el microbioma vaginal entre pacientes con POP y con intervenciones de restauración anatómica, y esperamos que nuestros hallazgos contribuyan a la comprensión del entorno del microbioma en pacientes con POP y con intervenciones de restauración anatómica.
Existen algunas limitaciones en este estudio: en primer lugar, el tamaño de la muestra de los grupos de pesario (n = 17) y postoperatorio (n = 11) fue pequeño en comparación con el grupo POP (n = 42), y está diseñado como un estudio transversal. , y las muestras no son del mismo paciente antes y después del tratamiento. En realidad, la muestra de nuestro estudio se determinó en función de la disponibilidad de participantes elegibles durante el período del estudio. En segundo lugar, la definición del estadio del prolapso puede ser subjetiva y hubo muchos casos sin diagnóstico, incluso en presencia de síntomas. Por lo tanto, se necesitan más investigaciones prospectivas para determinar el impacto y el cambio del POP en el microbioma vaginal.
El tratamiento (inserción de pesario u operación reconstructiva) para el POP puede conducir a la resolución del malestar estructural. Sin embargo, también hay evidencia que sugiere que es posible que estos tratamientos no restablezcan completamente el equilibrio del microbioma vaginal. Por lo tanto, es importante abordar cualquier desequilibrio en el microbioma vaginal como parte del plan de tratamiento general para prevenir enfermedades ginecológicas adicionales.
El estudio fue aprobado por el Comité Científico y de Ética Institucional (número de protocolo: HC20TISIO100). Para el estudio se reclutaron todas las pacientes con POP que visitaron el Departamento de Obstetricia y Ginecología del hospital universitario, entre octubre de 2020 y febrero de 2022. Se obtuvo el consentimiento informado y los participantes fueron evaluados para confirmar su elegibilidad antes de la inscripción y todos los métodos se llevaron a cabo de acuerdo con las directrices y regulaciones pertinentes.
Se excluyeron las mujeres que usaban antibióticos, humectantes vaginales o tabletas vaginales, ya que estos productos afectan la microbiota vaginal. Se inscribieron setenta participantes, entre 45 y 95 años de edad. Los participantes se clasificaron en tres grupos para el estudio transversal: (a) Grupo de prolapso (n = 42): pacientes diagnosticados con POP, utilizando el sistema de cuantificación de prolapso de órganos pélvicos (POP-Q) aprobado por la Sociedad Internacional de Continencia25, y monitorizados sin tratamiento. ; (b) Grupo de pesario (n = 17): pacientes POP tratadas con inserción de pesario y monitorizadas durante más de 6 meses; (c) Grupo postoperatorio (n = 11): pacientes POP tratadas con operación reconstructiva pélvica (histerectomía total vaginal asistida por laparoscopia con colpoperineorrafia anteroposterior y suspensión del ligamento uterosacro) y monitorizadas durante más de seis meses (Fig. 5).
Diagrama que muestra el número de pacientes dentro de cada grupo de estudio (prolapso, pesario y postoperatorio).
Se registraron las características de los pacientes, antecedentes médicos y/o quirúrgicos. Se realizó un examen pélvico estandarizado utilizando un espéculo estéril en posición de litotomía. Un médico recogió muestras de los participantes del fondo de saco posterior de la pared vaginal utilizando un hisopo flocado (hisopo NFS-2; Noble Biosciences, Inc., Whaseong-si, Corea) que se colocó en 1 ml de solución salina tamponada con fosfato y se almacenó a −80 °C. En caso de abultamiento de órganos pélvicos, la reducción se realizó por vía intravaginal y, para el grupo de pesario, el examen se realizó en presencia del pesario.
Para el análisis de citoquinas, las muestras de hisopos vaginales se descongelaron en hielo, se agitaron durante aproximadamente 10 segundos y se centrifugaron a 2500 rpm durante 10 minutos. El sobrenadante de la muestra se transfirió a un nuevo tubo de microcentrífuga y las citoquinas de la muestra (n = 10: IFN-γ, IL-10, IL-12p70, IL-1β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, MIP -1b y TNFα) se cuantificaron utilizando un inmunoensayo múltiplex basado en perlas magnéticas de citocinas/quimiocinas humanas MILLIPLEX MAP (Millipore, Billerica, MA). Los niveles de citocinas/quimiocinas se midieron con el instrumento FLEXMAP 3D y se analizaron utilizando el software xPONENT V4.2 para el sistema Lumniex 200 (Luminex Corporation, Austin, EE. UU.).
Para la extracción de ADN, se descongelaron en hielo muestras de hisopos vaginales en 1 ml de medio de conservación de ácido nucleico. Posteriormente, se agitó durante aproximadamente 10 s y se centrifugó a 2500 rpm durante 10 min y los sobrenadantes se transfirieron a tubos nuevos. Se añadieron 450 µL de sobrenadante a 300 µL de isopropanol y se agitó durante 30 s. La mezcla se colocó en una columna de centrifugación DNeasy Mini del kit Qiagen DNeasy Blood and Tissue (QIAGEN, Venlo, Países Bajos) y la extracción de ADN se realizó según el protocolo del fabricante. La concentración y la pureza del ADN se midieron utilizando un espectrofotómetro (Eppendorf D30 (Eppendorf, Hamburgo, Alemania)). Para la secuenciación del ARNr 16S se utilizó una concentración de ADN mayor o igual a 15 ng/μl con una relación A260/A280 de 1,8 a 2,0. El ADN genómico se amplificó mediante PCR, utilizando los cebadores de fusión 341F (5′-AATGATACGGGCGACCACCGAGATCTACAC-XXXXXXXX-TCGTCGGCAGCGTC-AGATGTGTATAAGAGACAG-CCTACGGGNGGCWGCAG-3′) y 805R (5′-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGAT-XXXXXXXX-GTCTCGTGGGCTCGG-AGATGTGTATAAGAGACAG-G ACTACHVGGGTATCTAATCC-3′; secuencia subrayada indica la región complementaria del cebador) que se une a las regiones V3-V4 del gen 16S rRNA, como se informó anteriormente26.
Las lecturas de secuencia sin procesar se procesaron previamente para controles de calidad, incluido el recorte de amplicones de baja calidad, cálculo de diversidad, análisis de perfil taxonómico de microbioma comparativo (MTP) y análisis de descubrimiento de biomarcadores taxonómicos, utilizando una aplicación EzBioCloud (CJ Bioscience, Inc., Seúl). , Corea), como se informó anteriormente26. Los índices de diversidad alfa se calcularon utilizando ACE y Chao1 para la riqueza de especies, y Shannon y NPShannon para medir la diversidad y la uniformidad de las especies, respectivamente. Para visualizar las diferencias de las muestras, se calcularon las distancias de diversidad beta utilizando el análisis de coordenadas principales (PCoA) basado en el método de Jensen-Shannon. El análisis de significancia del conjunto beta entre dos conjuntos de MTP se realizó mediante la prueba de análisis de varianza multivariado permutacional (PERMANOVA). Los biomarcadores taxonómicos se mostraron utilizando el cladograma basado en el análisis discriminante lineal (LDA) del tamaño del efecto (LEfSe)23.
Se utilizaron pruebas de comparación no paramétricas (prueba de Kruskal-Wallis para más de dos grupos y prueba U de Mann-Whitney para dos grupos) para comparar los resultados de MTP utilizando MedCalc versión 20.114 (software MedCalc, https://www.medcalc.org/ , Ostende, Bélgica). Un valor de p inferior a 0,05 se consideró estadísticamente significativo.
Las secuencias del gen 16S rRNA se enviaron al NCBI Sequence Read Archive SRA y están disponibles con el ID de BioProject PRJNA965912.
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Este trabajo fue apoyado por el Instituto de Investigación en Medicina Clínica del Fondo de Investigación del Hospital Bucheon St. Mary, 2020.
Estos autores contribuyeron igualmente: Myungshin Kim y Seungok Lee.
Departamentos de Medicina de Laboratorio, Hospital St. Mary's de Seúl, Facultad de Medicina, Universidad Católica de Corea, Seúl, República de Corea
Myungshin Kim y Hoon Seok Kim
Departamentos de Medicina de Laboratorio, Hospital St. Mary's de Incheon, Facultad de Medicina, Universidad Católica de Corea, Seúl, República de Corea
Seungok Lee y Jaeeun Yoo
Departamentos de Investigación en Medicina Clínica, Hospital Bucheon St. Mary, Universidad Católica de Corea, Seúl, República de Corea
Mi Yeon Kwon
Departamentos de Obstetricia y Ginecología, Bucheon St. Mary's Hospital, Facultad de Medicina, Universidad Católica de Corea, Seúl, 14647, República de Corea
Min Jeong Kim
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MJK: Concepción y Diseño del trabajo, y Adquisición, Análisis e Interpretación de datos, y Redacción y Revisión del manuscrito. SL: Adquisición, Análisis e Interpretación de datos. MK: Concepción y Diseño del trabajo, Análisis e Interpretación de datos, y Redacción y Revisión del manuscrito. MYK: Análisis e Interpretación de datos. JY: Análisis e Interpretación de datos, y Redactó y revisó el manuscrito. HSK: Redacción del artículo y Revisión del manuscrito. Todos los autores aprobaron la versión final del manuscrito.
Correspondencia a Min Jeong Kim.
Los autores declaran no tener conflictos de intereses.
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Reimpresiones y permisos
Kim, M., Lee, S., Kim, HS y col. Alteraciones del microbioma en mujeres con prolapso de órganos pélvicos y después de intervenciones de restauración anatómica. Representante científico 13, 17547 (2023). https://doi.org/10.1038/s41598-023-44988-6
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Recibido: 19 de abril de 2023
Aceptado: 14 de octubre de 2023
Publicado: 16 de octubre de 2023
DOI: https://doi.org/10.1038/s41598-023-44988-6
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